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實(shí)驗室滅菌消毒怎么做更*?

更新時(shí)間:2022-04-19瀏覽:1756次

 一、消毒和滅菌的區別

  1、消毒(disinfectioninhospital):殺滅或消除醫院環(huán)境中媒介物上污染的病原微生物的過(guò)程.
  2、滅菌(sterilization):殺滅或去除外環(huán)境中媒介物攜帶的一切微生物的過(guò)程.包括致病微生物和非致病微生物,也包括細菌芽胞和真菌孢子.滅菌是個(gè)絕對的概念,滅菌后物品必須是*無(wú)菌的.即滅菌保證水平為106.
  二、高溫滅菌法
  高溫滅菌法是利用高溫使微生物的蛋白質(zhì)及酶發(fā)生凝固或變性而死亡,是應用*泛且有效的滅菌方法。主要用于器械、容器、試劑等滅菌。
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  為實(shí)驗室常用的高壓滅菌鍋(右圖來(lái)自《微生物實(shí)驗》一書(shū))
  用高溫加高壓滅菌,不僅可殺死一般的細菌,對細菌芽胞也有殺滅效果,是可靠、應用普遍的物理滅菌法。主要用于能耐高溫的物品,如金屬器械、玻璃、橡膠、耐高溫塑料制品及試劑的滅菌。高壓蒸氣滅菌器的類(lèi)型和樣式較多,如:①下排氣式壓力蒸氣滅菌器是普遍應用的滅菌設備,壓力升至102.9kPa,溫度達121~126℃,維持20~30分鐘,可達到滅菌目的。②脈動(dòng)真空壓力蒸氣滅菌器已成為目前的滅菌設備。滅菌條件要求:蒸氣壓力205.8kPa,溫度達132℃以上并維持10分鐘,即可殺死包括具有頑強抵抗力的細菌芽胞在內的一切微生物。
  濕熱滅菌是目前實(shí)驗室使用最為廣泛,滅菌的方法。目前濕熱滅菌的儀器技術(shù)上也非常成熟,安全系數較高。
  高壓蒸氣滅菌的注意事項:
  包裹的物品不宜太大,一般應小于30cm×30cm×50cm,大于該尺寸需要酌情延長(cháng)滅菌時(shí)間;
  1.高壓鍋內的包裹不要排得太密,以免妨礙蒸氣透入,影響滅菌效果;
  2.對塑料制品不宜放置過(guò)于擁擠,以免發(fā)生形變;
  3.壓力、溫度和時(shí)間達到要求時(shí),指示帶上和化學(xué)指示劑即應出現已滅菌的色澤或狀態(tài);
  4.銳性器械,如刀、剪不宜用此法滅菌,以免變鈍;
  5.瓶裝液體滅菌時(shí),如有塑料瓶蓋要適當旋松瓶蓋,并用牛皮紙或紗布包扎瓶口;如有橡皮塞時(shí),應插入針頭排氣,切記要保持瓶?jì)韧獾倪B通,防止高溫膨脹爆裂;
  6.注明滅菌日期和物品保存時(shí)限,一般可保留1~2周;
  7.應有專(zhuān)人負責,每次滅菌前,應檢查安全閥的性能,以防壓力過(guò)高發(fā)生爆炸,保證安全使用。
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  滅菌條件為:160℃維持2小時(shí);170℃維持1小時(shí);180℃維持30分鐘;高溫下可達滅菌要求。適用于易被濕熱損壞和在干燥條件下使用更方便的物品(如金屬、玻璃、陶瓷及凡士林紗布條等)滅菌。由于其對烤箱要嚴格要求(國內產(chǎn)的烘箱質(zhì)量都有點(diǎn)懸),且大功率、高溫下危險系數較大,一般不建議使用!特殊情況下,如需要滅活器械、容器中對于溫度超級穩定的RNase時(shí),才考慮使用(其實(shí)也可以DEPC預處理器械、容器、溶劑等,然后濕熱滅菌?。?。
  干熱滅菌法的注意事項:
  1.對滅菌對象的理化性質(zhì)有一定了解,明確對象在高溫下的穩定性;
  2.對設備的情況、參數有清醒認識,了解設備的溫度設計上限;
  3.專(zhuān)項供電,確保接入電路足夠負荷;
  4.滅菌過(guò)程中,相關(guān)人員要實(shí)時(shí)在崗監管,不得離崗,如遇特發(fā)情況及時(shí)切斷電源!
  三、過(guò)濾除菌法
  過(guò)濾除菌法(Sterilizationbyfiltration)是用物理阻留的方法將液體或空氣的細菌除去,以達到無(wú)菌目的。常用于對熱不穩定液體試劑的滅菌。一般來(lái)說(shuō)孔徑為0.22μm的微濾膜即可有效地去除微生物達到除菌的目的,但該孔徑下無(wú)法去除體積極小的支原體或病毒顆粒。因此如果需要去除這些物體,就需要使用孔徑更小的納濾膜(孔徑可達20-50nm)。
  由于濾膜孔徑的大小和過(guò)濾的流速呈反比,因此我們通常在小孔徑濾膜之前使用大孔徑的濾膜進(jìn)行預過(guò)濾,從而防止微孔被過(guò)早的堵塞,保證過(guò)濾通暢進(jìn)行,進(jìn)而獲得更高的得率。
  在過(guò)濾除菌過(guò)程中要求過(guò)濾裝置和濾膜自身必須無(wú)菌。因此我們可以選擇購買(mǎi)已經(jīng)無(wú)菌預處理的一次性使用裝置(如Millipore的一次性針頭濾器),也可以選擇自行無(wú)菌處理,目前市售的濾膜通??梢圆捎酶邏簻缇ǔ?。
  注意事項:
  在正式過(guò)濾前,必須進(jìn)行過(guò)濾系統的密閉性和濾膜的完整性測試。過(guò)濾過(guò)程要在等級A的潔凈室內進(jìn)行(通??稍诔瑑襞_完成)。
  四、紫外線(xiàn)滅菌
  紫外線(xiàn)的定義是波長(cháng)在10納米到400納米之間的電磁輻射。不過(guò)在實(shí)際應用中,使用的波長(cháng)一般在100納米以上。波長(cháng)在315到409納米之間的UVA通??梢园哑つw曬黑,波長(cháng)280到315納米的UVB可以灼傷皮膚并增加皮膚癌風(fēng)險,波長(cháng)在200到280納米的UVC可以有效地殺滅細菌和病毒,而波長(cháng)在100到200納米之間的紫外線(xiàn)會(huì )被空氣中的氧氣吸收,所以只能在真空中或者至少是*無(wú)氧的環(huán)境里工作,也就不適合用于現實(shí)殺菌了。傳統的紫外殺菌選用254納米的波長(cháng)。
  從左到右分別是X-射線(xiàn)、紫外光??梢?jiàn)光、紅外光,光的波長(cháng)依次遞增。常用的殺菌波長(cháng)254納米位于紫外光中遠紫外線(xiàn)(UVC)波段。圖片來(lái)源:tecnowattsnc.it
  當紫外線(xiàn)被細菌或者病毒吸收之后,就會(huì )破壞DNA,從而使它們失去增殖能力。就殺菌結果而言,跟加熱或者用化學(xué)物質(zhì)處理是一樣的。
  紫外殺菌的能力除了跟波長(cháng)有關(guān),還取決于滅菌物被輻射到的能量。在選定的254納米波長(cháng)下,殺菌效果跟能量強度呈現一個(gè)拉伸過(guò)的S型。也就是說(shuō),在低能量下,殺菌效果很差,這是因為細菌或者病毒跟人體一樣,對于DNA損傷有一定的修復能力。在照射能量低的時(shí)候,損傷的DNA被及時(shí)修復,細菌和病毒就能夠繼續增殖下去。當能量高到一定程度,DNA修復系統實(shí)在忙不過(guò)來(lái)了,DNA損傷急劇增加,宏觀(guān)上表現出來(lái)就是細菌或病毒被“殺死”了。超過(guò)這個(gè)能量強度,每增加一點(diǎn),滅菌能力都會(huì )大大增加。但是增加到一定程度,就進(jìn)入第二個(gè)平臺——再繼續增高能量,殺菌效果增加得也很少。這個(gè)滅菌效果上的“尾巴”可能是源于一部分微生物對于紫外線(xiàn)攻擊很頑強,也可能源于有一部分被處理樣品無(wú)法被照射到。
  因為這個(gè)“尾巴”的存在,紫外殺菌難以實(shí)現加熱或者化學(xué)殺菌劑那么*的殺滅。通常把降低4個(gè)對數值作為“滅菌標準”,也就是還有萬(wàn)分之一的細菌活下來(lái)。而鮮牛奶的巴氏殺菌——在72攝氏度下處理15秒——則通常是降低5個(gè)對數值,即最多只有十萬(wàn)分之一的細菌存活。如果降低的對數值是12個(gè)以上,幾乎就沒(méi)有細菌能夠幸存了。
  不同的微生物對紫外線(xiàn)的敏感性不同,有的在較低能量強度下就會(huì )被大量殺滅,而有的則需要更高能量才行。以降低4個(gè)對數值為標準,研究中檢測過(guò)的細菌有的只需要每平方米幾十焦耳的能量,有的則需要每平方米300焦耳以上。我們并不知道現實(shí)的食物中存在哪些細菌,又各有多少,所以總是把最頑強的那個(gè)作為目標,順便把其他的滅了。因此,紫外殺菌所用的能量強度需要在每平方米400焦耳以上。
  各種滅菌技術(shù)的滅菌效果都會(huì )受到滅菌物理化性質(zhì)的影響。比如加熱或者高壓滅菌,溫度、酸堿度和壓力都會(huì )有很大影響。而在紫外滅菌中,這些因素就不那么重要。紫外殺菌的關(guān)鍵是紫外線(xiàn)能夠達到細菌,所以穿透性是關(guān)鍵。諸如滅菌物的組成、固體含量、顏色等因素都會(huì )影響紫外線(xiàn)的吸收,從而影響它穿透的厚度,也就對殺菌效果有很大的影響。如果滅菌物均一、透明,紫外線(xiàn)的穿透性好,滅菌效果就會(huì )好;反之,如果滅菌物渾濁,那么紫外線(xiàn)就會(huì )被散射,能量在穿透中降低,滅菌效果就會(huì )比較差。
  總的來(lái)說(shuō),紫外線(xiàn)的穿透能力比較差,通常也就能穿透兩三厘米的厚度。但如果用在某些物質(zhì)短時(shí)間滅菌,效果還是很好的。
  注意事項:
  1.選擇紫外燈時(shí),應該仔細核對型號、適用范圍和注意事項。不要進(jìn)入開(kāi)啟紫外消毒燈的室內。千萬(wàn)不要對著(zhù)消毒燈驗鈔或者觀(guān)察熒光,任何時(shí)候都不應該直視紫外燈管。紫外燈應該盡可能只在封閉空間內小范圍使用,并避免不必要的暴露
  2.在使用過(guò)程中,應保持紫外線(xiàn)燈表面的清潔,一般每?jì)芍苡镁凭耷虿潦靡淮?,發(fā)現燈管表面有灰塵、油污時(shí),應隨時(shí)擦拭。
  3.用紫外線(xiàn)消毒物品表面時(shí),應使照射表面受到紫外線(xiàn)的直接照射,且應達到足夠的照射劑量
  五、化學(xué)消毒滅菌
 ?。?)浸泡法選用殺菌譜廣、腐蝕性弱、水溶性消毒劑,將物品浸沒(méi)于消毒劑內,在標準的濃度和時(shí)間內,達到消毒滅菌目的。
 ?。?)擦拭法選用易溶于水、穿透性強的消毒劑,擦拭物品表面,在標準的濃度和時(shí)間里達到消毒滅菌目的。
 ?。?)薰蒸法加熱或加入氧化劑,使消毒劑呈氣體,在標準的濃度和時(shí)間里達到消毒滅菌目的。
  適用于室內物品及空氣消毒或精密貴重儀器和不能蒸、煮、浸泡的物品(血壓計、聽(tīng)診器以及傳染病人用過(guò)的票證等),均可用此法消毒。
 ?。?)噴霧法借助普通噴霧器或氣溶膠噴霧器,使消毒劑產(chǎn)生微粒氣霧彌散在空間,進(jìn)行空氣和物品表面的消毒。
 ?。?)環(huán)氧乙烷氣體密閉消毒法將環(huán)氧乙烷氣體置于密閉容器內,在標準的濃度、濕度和時(shí)間內達到消毒滅菌目的。
  環(huán)氧乙烷是廣譜氣體殺菌劑,能殺滅細菌繁殖體及芽胞,以及真菌和病毒等。穿透力強,對大多數物品無(wú)損害,消毒后可迅速揮發(fā),特別適用于不耐高熱和溫熱的物品,如精密器械、電子儀器、光學(xué)儀器、心肺機、起博器、書(shū)籍文件等,均無(wú)損害和腐蝕等副作用。本品沸點(diǎn)為10.8℃,只能灌裝于耐壓金屬罐或特制安瓿瓶中。
  注意事項
  1.易燃易爆品存放在陰涼、通風(fēng)、無(wú)火源、無(wú)電開(kāi)關(guān)處。用時(shí)輕取輕放,勿猛烈碰撞。2.消毒時(shí),應注意環(huán)境的相對濕度和溫度。鋼瓶需加溫時(shí),熱水不可超過(guò)70℃。
  3.對皮膚、眼及粘膜刺激性強的液體,如有接觸,立即用水沖洗。
  4.在有毒氣體消毒的操作過(guò)程中,如有頭昏頭痛等中毒癥狀時(shí),應立即離開(kāi)現場(chǎng),至通風(fēng)良好處休息。
  六、火焰滅菌
  是指用火焰直接燒灼的滅菌方法。該方法滅菌迅速、可靠、簡(jiǎn)便,適合于耐火焰材料(如金屬、玻璃及瓷器等)物品與用具的滅菌,不適合藥品的滅菌。
  最常見(jiàn)的火焰滅菌,酒精燈。
  為加熱接種環(huán)。
  注意事項:
  1、酒精燈的燈芯要平整.
  2、添加酒精時(shí),不超過(guò)酒精燈容積的2/3;酒精不少于1/4.
  3、絕對禁止向燃著(zhù)的酒精燈里添加酒精,以免失火.
  4、絕對禁止用酒精燈引燃另一只酒精燈.
  5、用完酒精燈,必須用燈帽蓋滅,不可用嘴去吹.
  6、不要碰倒酒精燈,萬(wàn)一灑出的酒精在桌上燃燒起來(lái),應立即用濕布撲蓋.

 

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